परीक्षण का सारांश और स्पष्टीकरण
मलेरिया एक मच्छर जनित, हेमोलिटिक, ज्वर संबंधी बीमारी है जो 200 मिलियन से अधिक लोगों को संक्रमित करती है और प्रति वर्ष 1 मिलियन से अधिक लोगों की जान ले लेती है।यह प्लाज्मोडियम की चार प्रजातियों के कारण होता है: पी. फाल्सीपेरम, पी. विवैक्स, पी. ओवले, और पी. मलेरिया।ये प्लास्मोडिया मानव एरिथ्रोसाइट्स को संक्रमित और नष्ट कर देते हैं, जिससे ठंड लगना, बुखार, एनीमिया और स्प्लेनोमेगाली पैदा होती है।पी. फाल्सीपेरम अन्य प्लास्मोडियल प्रजातियों की तुलना में अधिक गंभीर बीमारी का कारण बनता है और अधिकांश मलेरिया से होने वाली मौतों का कारण बनता है।पी. फाल्सीपेरम और पी. विवैक्स सबसे आम रोगजनक हैं, हालांकि, प्रजातियों के वितरण में काफी भौगोलिक भिन्नता है।
परंपरागत रूप से, मलेरिया का निदान परिधीय रक्त के गिम्सा सने हुए मोटे धब्बों पर जीवों के प्रदर्शन से किया जाता है, और प्लास्मोडियम की विभिन्न प्रजातियों को संक्रमित एरिथ्रोसाइट्स1 में उनकी उपस्थिति से पहचाना जाता है।तकनीक सटीक और विश्वसनीय निदान करने में सक्षम है, लेकिन केवल जब कुशल सूक्ष्मदर्शी द्वारा परिभाषित प्रोटोकॉल 2 का उपयोग करके किया जाता है, जो दुनिया के दूरदराज और गरीब क्षेत्रों के लिए बड़ी बाधाएं प्रस्तुत करता है।
इन बाधाओं के समाधान के लिए मलेरिया पीएफ/पैन एंटीजन रैपिड टेस्ट किट विकसित की गई है।परीक्षण पी. फाल्सीपेरम विशिष्ट प्रोटीन, हिस्टिडीन रिपीट प्रोटीन II (पीएचआरपी-II) के लिए मोनोक्लोनल और पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी की एक जोड़ी और प्लास्मोडियम लैक्टेट डीहाइड्रोजनेज (पीएलडीएच) के लिए मोनोक्लोनल एंटीबॉडी की एक जोड़ी का उपयोग करता है, जो प्लास्मोडियम की चार प्रजातियों द्वारा उत्पादित प्रोटीन है, इस प्रकार पी. फाल्सीपेरम और या अन्य तीन प्लास्मोडिया में से किसी एक के साथ संक्रमण का एक साथ पता लगाने और भेदभाव करने में सक्षम बनाता है।इसे प्रयोगशाला उपकरणों के बिना, अप्रशिक्षित या न्यूनतम कुशल कर्मियों द्वारा किया जा सकता है।
सिद्धांत
पीएफ/पैन मलेरिया रैपिड टेस्ट किट एक पार्श्व प्रवाह क्रोमैटोग्राफिक इम्यूनोपरख है।परीक्षण पट्टी घटकों में शामिल हैं: 1) एक बरगंडी रंग का संयुग्म पैड जिसमें कोलाइड गोल्ड (पीएचआरपी II-गोल्ड कंजुगेट्स) के साथ संयुग्मित माउस एंटी-पीएचआरपी-II एंटीबॉडी और कोलाइड गोल्ड (पीएलडीएच-गोल्ड कंजुगेट्स) के साथ संयुग्मित माउस एंटी-पीएलडीएच एंटीबॉडी होता है।
2) एक नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली पट्टी जिसमें दो परीक्षण बैंड (पैन और पीवी बैंड) और एक नियंत्रण बैंड (सी बैंड) होते हैं।पैन बैंड को मोनोक्लोनल एंटी-पीएलडीएच एंटीबॉडी के साथ पूर्व-लेपित किया जाता है, जिसके द्वारा प्लास्मोडिया की चार प्रजातियों में से किसी के साथ संक्रमण का पता लगाया जा सकता है, पीएफ बैंड को पीएफ संक्रमण का पता लगाने के लिए पॉलीक्लोनल एंटी-पीएचआरपी-II एंटीबॉडी के साथ पूर्व-लेपित किया जाता है, और सी बैंड को बकरी एंटी-माउस आईजीजी के साथ लेपित किया जाता है।
परख के दौरान, रक्त के नमूने की पर्याप्त मात्रा को परीक्षण कैसेट के नमूना कुएं (एस) में भेज दिया जाता है, बफर कुएं (बी) में एक लिसीस बफर जोड़ा जाता है।बफर में एक डिटर्जेंट होता है जो लाल रक्त कोशिकाओं को नष्ट करता है और विभिन्न प्लास्मोडियम एंटीजन छोड़ता है, जो कैसेट में रखी पट्टी के पार केशिका क्रिया द्वारा स्थानांतरित होते हैं।यदि नमूने में pHRP-II मौजूद है तो वह pHRP II-सोने के संयुग्मों से बंध जाएगा।फिर इम्यूनोकॉम्पलेक्स को पूर्व-लेपित एंटी-पीएचआरपीआईआई एंटीबॉडी द्वारा झिल्ली पर कब्जा कर लिया जाता है, जिससे बरगंडी रंग का पीएफ बैंड बनता है, जो पीएफ सकारात्मक परीक्षण परिणाम का संकेत देता है।यदि नमूने में pLDH मौजूद है तो वह pLDH सोने के संयुग्मों से बंध जाएगा।इसके बाद इम्युनोकॉम्पलेक्स को प्री-कोटेड एंटी पीएलडीएच एंटीबॉडी द्वारा झिल्ली पर कैद कर लिया जाता है, जिससे बरगंडी रंग का पैन बैंड बनता है, जो प्लास्मोडियम पॉजिटिव परीक्षण परिणाम का संकेत देता है।पैन बैंड की अनुपस्थिति में, अन्य तीन प्लास्मोडिया में से किसी एक के लिए सकारात्मक परीक्षण परिणाम की सिफारिश की जा सकती है।
किसी भी परीक्षण बैंड (पैन और पीएफ) की अनुपस्थिति एक नकारात्मक परिणाम का सुझाव देती है।परीक्षण में एक आंतरिक नियंत्रण (सी बैंड) होता है, जिसे किसी भी परीक्षण बैंड पर रंग विकास की परवाह किए बिना बकरी विरोधी माउस आईजीजी / माउस आईजीजी (पीएचआरपी-द्वितीय और पीएलडीएच-गोल्ड संयुग्म) के इम्यूनोकॉम्प्लेक्स का बरगंडी रंग का बैंड प्रदर्शित करना चाहिए।अन्यथा, परीक्षण का परिणाम अमान्य है और नमूने का किसी अन्य उपकरण से दोबारा परीक्षण किया जाना चाहिए।
